近年来，液体活检由于其低侵入性及能够实现频繁或连续采样而备受关注。这种技术允许医学专家持续追踪肿瘤的进展及治疗反应。其中，细胞外囊泡（Extracellular Vesicles, EV）成为一个关键的研究方向。EV是由细胞释放，具有脂质双分子层的膜结构，内部含有多种成分，包括脂质、蛋白质和RNA，其能够真实反映活体细胞状态，因此越来越多地被用于生物标志物的开发。

研究表明，EV中的miRNA生物标志物组合的诊断性能普遍优于单一生物标志物，并且EV中的miRNA在血浆中的诊断价值稍高于血清。此外，有研究通过分析前列腺癌患者尿液中的miRNA差异表达，发现10种miRNA可以作为前列腺癌早期检测的工具。关于EV中的长链RNA，相关研究发现血液来源的EV中长链RNA的表达谱可作为胰腺导管腺癌的 diagnostic biomarkers，有效区分健康个体与恶性肿瘤患者。

传统方法研究血液中cfRNA时，通常采用短读长测序，但该技术在解析全长转录本异构体及复杂RNA加工事件方面受限。相对而言，cfRNA中的EV RNA具有更好的完整性及更长的长度，因此采用长读长RNA测序可以直接对EV RNA全长转录本进行测序，从而识别更多新型RNA异构体，实现更高效准确的临床应用价值。

加州大学圣克鲁兹分校的Daniel Kim研究小组意识到了长读长测序的潜力，并专注于通过该技术检测血液中的EV RNA，以验证其在疾病诊断中的作用。该团队发现，现有的DNA液体活检方法可能会遗漏癌症的早期阶段，而及早诊断癌症可提前治疗，最终降低死亡率。通过COMPLETE-seq RNA流程，他们基于高特异性的膜亲和技术及硅胶膜柱法从血浆中提取EV RNA，随后结合纳米孔技术与短读长测序技术进行全面的转录组分析。研究结果显示，循环RNA的重复序列在血液中含量丰富，具有作为疾病特异性诊断生物标志物的潜力，这些发现已发表在《Nature Biomedical Engineering》期刊上。

在该研究中，首先来自血浆的EV RNA被提取，并反转录为cDNA进行文库制备，之后分别进行短读长与长读长测序，并进行基因差异表达及cfRNA长度分析。长读长RNA测序结果显示，几乎所有胰腺癌患者血液中均发现大量来自重复序列的游离RNA，其中大部分源自SINE元件。此外，根据癌症基因组图谱计划（TCGA）及GTEX联盟的正常样本数据，该团队发现在食道癌患者中，数百个重复衍生的转录本具有特异性富集，表明重复RNA序列可以作为疾病特异性诊断生物标志物。

以往的研究表明，血浆中的cfRNA往往较短且片段化，但该研究小组通过全长cDNA纳米孔测序，对胰腺癌患者及对照组血浆样本进行了细致表征，结果显示其长度与过去的结论截然不同。长读长测序数据显示：mRNA的长度可达1,337nt（中位数456nt），lncRNA为970nt（中位数303nt），LINE为1,002nt（中位数258nt），SINE为368nt（中位数185nt），LTR为477nt（中位数167nt），明显揭示了全长、多腺苷酸化以及带帽子的RNA分子的存在，这为该领域提供了新的见解。

在这项研究中，健康对照与胰腺癌患者血液样本经过处理得到高完整度的EVRNA，并由exoRNeasy试剂盒快速高效地提取。该系列试剂盒支持从4mL血清/血浆中高效分离EV，且全程无需超速离心或沉淀步骤，仅需25分钟即可完成操作，为后续小RNA的检测打下基础。若需深入了解EV及其他RNA相关信息，欢迎扫码获取更多资料，带您了解生物医疗的前沿动态。

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