### 支原体的概念与污染影响

支原体（Mycoplasma）是迄今为止已知的最小、最简单的无细胞壁原核生物，其直径范围在0.1~0.3μm之间。由于其可以通过滤膜且具高度多形性，支原体成为哺乳动物细胞培养中相当常见且难以检测的污染物。因其能形成丝状和分枝状体形态，因此被称为支原体。

在生物学分类中，支原体属于柔膜菌门、柔膜菌纲，并进一步细分为不同的目、科、属。广泛研究的支原体目和支原体科主要包含支原体属和脲原体属。支原体的污染极大地影响细胞培养，已成为细胞培养过程中面临的一大严重问题。保守估计，常规细胞培养中的支原体污染率在15%~35%之间，这严重干扰了实验结果的可信度。

细胞培养中的95%支原体污染主要由莱氏无胆甾原体、精氨酸支原体、口腔支原体、发酵支原体、人型支原体和猪鼻支原体引起。支原体在培养基上形成的菌落呈“煎鸡蛋”状。细胞培养的上清液和细胞膜为支原体提供了适宜的生长环境，寄生在宿主细胞表面的支原体还能够穿透细胞膜。

支原体污染的来源主要包括细胞培养液或其成分（如培养基原料、血清和其他试剂）、实验室工作人员、细胞培养箱、液氮培养箱、空气中的微粒和气溶胶、抗生素的过度使用、密封不当的细胞培养物以及被支原体污染的细胞等。

支原体污染带来的危害包括：导致细胞制品或使用细胞为介质的产品在下游纯化过程中可能因未能有效去除支原体而导致批次作废，污染接触过的所有相关设备和设施，甚至中间或最终产品。同时，这也可能导致其他正常细胞受到支原体的污染，重要的细胞或病毒种子库面临废弃风险，最终可能迫使实验室整体环境受到污染并停止生产或实验操作以进行支原体去除。此外，支原体可能产生耐受性，使其更难以清除，污染范围也随之扩大，对实验室其他细胞培养物造成威胁。

因此，定期进行支原体检测和去除，确保细胞培养体系中不含支原体，是保障科学研究工作的关键。

### 支原体检测方法概述

在生物制药和细胞研究领域，支原体污染已成为一个需要严肃对待的问题，因为它可能会直接影响实验结果和产品质量。因此，支原体检测在确保细胞培养物和生物制品的安全性及可靠性方面至关重要。

当前常用的支原体检测方法包括培养法、PCR（聚合酶链式反应）法、荧光染色法、ELISA（酶联免疫吸附试验）法、qPCR（实时定量PCR）、代谢活性测定（例如ATP酶法）等。对于这些检测方法，以下是各自的优缺点：

1. **培养法**：灵敏度高，专属性强，但需要建立P2实验室并且检测周期长达28天，存在交叉污染风险，部分支原体菌株在培养中难以生长。

2. **指示细胞法**：同样灵敏度高，但敏感性较低，并需要较长的检测周期。

3. **NAT法（核酸扩增技术）**：灵敏度高，但结果可靠性依赖于样本质量，且有可能因为交叉污染而导致假阳性。检测周期仅为一天，简单快速。

4. **ELISA法**：实验简单快捷，但依赖于抗体，存在局限性。

5. **ATP酶法**：灵敏度高，但需要配合荧光检测仪器，并且检测限可能无法满足药典要求。

6. **等温扩增法**：实验简单及快速，但结果的可见性可能受到样本基质干扰。

在选择合适的支原体检测方法时，应考虑检测结果的用途（例如是否用于产品放行），是否符合药典要求，是否经过验证确保方法的灵敏度、专属性和耐用性等。

而对于涉及产品放行的检测，需使用药典规定的培养法或指示细胞法，或者验证与药典规定可比的NAT法（例如qPCR法）。而不涉及产品放行的例子中，可快速支原体检测方法如巢式PCR法、LAMP等温扩增法、qPCR法、ATP酶法和ELISA法等可以作为首选。

### 支原体巢式PCR检测产品介绍

基于核酸扩增技术（NAT），尊龙凯时人生就博推出了一系列针对支原体快速检测的产品，包括荧光探针qPCR法支原体检测试剂盒、一步恒温显色法及巢式PCR法支原体检测试剂盒。

其中，支原体PCR检测试剂盒（巢式PCR）依托两轮PCR扩增技术，针对支原体16S-23SrRNA序列的保守区域设计两套引物，以第二轮扩增产物为判断基准，对多种生物材料中的支原体感染进行检测。该试剂盒具有较高的灵敏度，可确切于25copies/μL，特异性强，适用于日常细胞培养上清液的检测，表现出方便、快速等优势。

通过使用尊龙凯时人生就博的检测盒，用户可以防止由于引物与模板的非特异配对导致的假阴性，从而确保实验结果的准确性。该产品专为支原体快速检测而设计，非常适合日常和研发早期的细胞使用。